目的探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的分子流行病学特点,揭示其对头孢他啶/阿维巴坦(CZA)的耐药机制。方法收集2021年1月—2023年9月徐州医科大学附属医院临床首次分离的CZA耐药CRKP,采用基因扩增法和胶体金法检测bla_KPC、bla_NDM、bla_OXA、bla_VIM和bla_IMP五种碳青霉烯酶基因携带情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(KPC-KP)相对拷贝数以及表达量,采用全基因测序方法分析KPC突变株的突变位点,以分析CRKP流行特征及对CZA的耐药机制。结果共分离73株对CZA耐药的CRKP,其中37株(50.68%)为KPC+NDM联产菌株,33株(45.21%)为单产NDM的菌株(单产NDM-5 23株,单产NDM-1 10株),3株单产KPC的菌株。发现菌株KP-2842为ST11型KPC-33突变株;菌株KP-2127和KP-2189为产KPC-2菌株,与肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1705相比,其bla_KPC拷贝量分别上调1.04~3.86倍,而表达量分别增加6.66~12.93倍;胶体金法与PCR结合双向测序方法两者结果一致性良好,同时可以覆盖联产酶及KPC-33突变体的检测。结论该院CRKP对CZA耐药机制主要由金属酶NDM介导,其中NDM、KPC联产是本地区CRKP的主要特点,部分菌株对CZA耐药可能由bla_KPC-2高拷贝和高表达导致,并在江苏地区的ST11型CRKP中首次发现了KPC-33突变体。